Бак посів: суть аналізу, як здавати, розшифровка, чутливість до антибіотиків

Бактеріологічний (бак) посів: як проводиться, способи, підготовка, результати, ефективність

Відомо, що мікроорганізми, незважаючи на свій малий зріст», теж мають харчові «пристрасті», температурний оптимум, загалом, середовище, яке їм підходить, де вони відчувають себе комфортно і добре, а тому починають інтенсивно розмножуватися і рости.

Бактеріологічний посів або, як прийнято називати коротше – бак посів, застосовується для одержання великої кількості мікробів одного виду (чиста культура) з метою вивчення їх фізико-хімічних і біологічних властивостей, щоб потім отримані дані використовувати для діагностики інфекційних захворювань.

На жаль, навіть популярні нині імуноферментний аналіз (ІФА), полімеразна ланцюгова реакція (ПЛР) та інші методи, основним недоліком яких є псевдопозитивні або хибнонегативні результати, не завжди можуть ідентифікувати збудника. Крім того, вони не здатні підібрати антибактеріальні препарати спрямованої дії. Подібне завдання вирішує бак посів, який часто не поспішають призначати, посилаючись на те, що, наприклад, уреа — мікоплазми повільно культивується, а вартість аналізу чимала. Проте ж і здоров’я того варте!

Для живлення і дихання потрібні умови

Мікробіологи нині знають, що кожному збудника потрібна своя «рідна» середовище з урахуванням її рН, окисно-відновних потенціалів, в’язкості, вологості та осмотичних властивостей. Середовища можуть бути м’якими і твердими, простими і складними, універсальними і не дуже, проте у всіх випадках вони повинні забезпечувати живлення, дихання, розмноження і ріст бактеріальної клітини.

приклад росту мікроорганізмів після бак посіву на живильне середовище

Деякі середовища (тиогликолевой, Сабуро) підходять для широкого кола мікроорганізмів і називаються універсальними. Інші ж призначені тільки для певних видів, наприклад, пневмокок та золотистий стафілокок, що продукують гемолізини, ростуть на кров’яному агарі, який служить для виділення особливо «примхливих» і, разом з тим, небезпечних штамів. Таким чином, різновидів середовищ безліч, де кожна з них вирощує своє коло мікроорганізмів.

Мета культивування мікроорганізмів і значущість її для діагностики

Крім води, повітря, грунту, що містять в тих чи інших концентраціях різні мікроорганізми, в тому числі і приносять хвороба (патогенні), багато галузей медичної науки цікавлять мікроби, що живуть на шкірі і слизових людського організму, які можуть бути представлені:

На щастя, багато з них переможені і в даний час знаходяться «за сімома печатками» в спеціальних лабораторіях, проте людство в будь-який момент має бути готовий до навалі невидимого ворога, здатного знищити цілі народи. Бактеріологічний посів у подібних випадках грає, мабуть, головну роль в ідентифікації мікроорганізму, тобто, визначення роду, виду, типу і т. д. (токсономическое положення), що дуже важливо для діагностики інфекційних процесів, в тому числі і захворювань, що передаються статевим шляхом.

Таким чином, методи посіву, як і живильні середовища, бувають різними, тим не менш, мета у них одна: отримати чисту культуру без сторонніх домішок у вигляді мікробів інших класів, які живуть повсюдно: у воді, в повітрі, на поверхні, на людину і всередині його.

Коли призначається бак посів і як розібратися у відповідях?

Назва мікроорганізму і його кількість

Бактеріологічний аналіз пацієнти самі собі не призначають, це робить лікар, якщо у нього є підозри, що проблеми хворого, пред’являють різні скарги, пов’язані з проникненням в організм патогенного збудника або з посиленим розмноженням мікроорганізмів, що постійно живуть з людиною, але виявляють патогенні властивості тільки в певних умовах. Здавши аналіз і через деякий час, отримавши на руки відповідь, людина губиться, а часом і лякається, побачивши незрозумілі слова і позначення, тому, щоб цього не сталося, хочеться дати коротке роз’яснення з даного питання:

1. Першим пунктом ув’язнення, як правило, коштує назва збудника латинською мовою, наприклад, Escherichia coli. Це — кишкова паличка, вона є природним мешканцем кишечника і в допустимих кількостях ніякої шкоди не приносить;
2. Наступний пункт – концентрація мікроорганізму. Е. coli — рясний ріст (1х10^6 і більше) норма — менш 1×10^4;
3. Далі – патогенність: флора умовно-патогенна.

При дослідженні біологічного матеріалу на наявність патогенних мікроорганізмів відповідь може бути негативним або позитивним («поганий бак посів»), оскільки організм людини є для них лише тимчасовим притулком, а не природною середовищем проживання.

Інколи, в залежності від того, який матеріал підлягає посіву, можна побачити кількість мікроорганізмів, виражене у колонієутворюючих одиницях на мл (одна жива клітина дасть зростання цілої колонії) – КУО/мл Наприклад, посів сечі для бактеріологічного дослідження при нормі дає до 103 КУО/мл всіх виявлених бактеріальних клітин, в сумнівних випадках (аналіз повторити!) – 103 – 104 КУО/мл, при запальному процесі інфекційного походження – 105 і вище КУО/мл двох останніх варіантах в розмовній язиці, часом, виражаються просто: «Поганий бак посів».

Як «знайти управу» на патогенний мікроорганізм?

Одночасно з посівом матеріалу в таких ситуаціях проводиться посів на чутливість мікрофлори до антибіотиків, який дасть чітку відповідь лікаря – які антибактеріальні препарати і в яких дозах «злякають» «непроханого гостя». Тут теж є своя розшифровка, наприклад:

Бактеріологічний аналіз являє особливу цінність у визначенні чутливості до антибіотиків, оскільки основною проблемою в боротьбі з хламідією, мікоплазмою, уреаплазмою та ін. залишається підбір дієвого лікування, не приносить шкоди організму і не ударяющего по кишені пацієнта.

Таблиця: альтернативний приклад результатів бак посіву з виявленням ефективних антибіотиків

Правильна підготовка до бактеріологічному аналізу – запорука достовірного результату

Бактеріологічному аналізу може піддаватися будь-який біологічний матеріал, взятий у людини (шкіра, кров, сперма, слизові ротової порожнини, дихальних і сечостатевих шляхів, шлунково-кишкового тракту, органів зору, слуху і нюху та ін). Найчастіше бак посів призначають гінекологи та урологи, тому на ньому варто трохи зупинитися.

Правильна підготовка до бактеріологічної посіву буде запорукою правильного результату, тому що в іншому випадку, доведеться здавати аналіз заново і чекати призначений час. Як здати кров на стерильність з відня – це завдання медпрацівників. Від хворого тут, як правило, нічого не залежить, він просто надає ліктьовий згин, а медсестра проводить забір в стерильну пробірку з дотриманням всіх правил асептики і антисептики.

Інша справа – сеча або мазок з статевих шляхів. Тут пацієнт повинен забезпечити перший етап (паркан), дотримуючи певні правила. Слід зауважити, що сеча жінок і чоловіків дещо відрізняється, хоча в сечовому міхурі у обох статей вона стерильна:

Однак, якщо вони знаходяться в допустимої концентрації (до 103 КУО/мл), то лякатися нема чого, це варіант норми.

Щоб уникнути присутності інших мікроорганізмів та максимально забезпечити стерильність взятого матеріалу, перед здачею аналізу проводиться ретельний туалет статевих органів (вхід у піхву у жінок закривається ватним тампоном – захист від попадання виділень статевих органів). Для аналізу береться середня порція сечі (початок сечовипускання в унітаз, приблизно 10 мл середньої порції в стерильну баночку, закінчення в унітаз). Пацієнтам необхідно знати: сеча, взята на посів, повинна бути оброблена не пізніше, чим через дві години при зберіганні не вище 20°С, тому слід розраховувати час на транспортування.

Крім цього матеріал на бак посів при необхідності беруть з уретри і прямої кишки у чоловіків, з уретри, прямої кишки, піхви, шийки матки і цервікального каналу у жінок, але це відбувається в медичному закладі, куди пацієнт повинен прибути. Підмивання, спринцювання і використання антисептичних засобів у таких випадках заборонено.

Інші питання, що хвилюють пацієнтів

Багато пацієнтів цікавляться, скільки днів робиться аналіз. Однозначно на це питання відповісти не можна, все залежить від того, який матеріал піддається дослідженню і який збудник потрібно шукати. Іноді відповідь готовий через 3 дні, іноді через тиждень або навіть днів 10 – 14, оскільки деякі зразки потребують пересіву на іншу середу.

Не обходять стороною люди, що прямують на бак посів і питання про ціну аналізу. Приблизна вартість у Москві становить близько 800 – 1500 рублів. Зрозуміло, вона може бути вище і залежить від широти спектру бактеріологічного пошуку. Безкоштовно аналіз, напевно, можна здати під час вагітності в жіночій консультації, або в поліклініці за особливими медичними показаннями.

Для вагітних бак посів є обов’язковим, здається 2 рази (при взятті на облік та в 36 тижнів), при цьому, мазок береться не тільки з статевих шляхів, але і зі слизових носа та зіва. Об’єктом пошуку в даному випадку, крім урогенітальних інфекцій, буде золотистий стафілокок (Staphylococcus aureus), який у післяпологовому періоді може накоїти багато лиха (гнійний мастит та ін). Крім цього, вагітним в обов’язковому порядку робиться посів сечі, зіскрібка піхвового епітелію та мазки з шийки матки і цервікального каналу.

Багато жінок, перед тим як відправитися на процедуру дуже бояться таких страшних слів і починають роздумувати: «А чи потрібно це? Може, не піти». Поспішаємо запевнити, що аналізи абсолютно безболісні. Мазок з шийки матки і цервікального каналу береться стерильної цитощеткой, не завдаючи жінці абсолютно ніякого болю, зате згодом бак посів ш/м і ц/до захистить і майбутню матір, і плід від можливих ускладнень. Об’єктом пошуку при вагітності є збудники хламідіозу, уреа — та мікоплазми, дріжджеподібний грибок роду Candida (зазвичай Candida albicans), трихомонади та інші умовно-патогенні і патогенні мікроорганізми.

Відео: ролик-демонстрація за бак посіву з цервікального каналу

Приватні випадки, особливо цікаві здають аналізи

Потрапивши в статеві шляхи патогенні мікроорганізми, через найкоротший час освоюються і починають свою шкідливу діяльність. Наприклад, завжди патогенні гонококи (Neisseria), які є винуватцями досить неприємної хвороби, званої гонореєю і відноситься до ЗПСШ, почувають себе «як удома» буквально на 3 день. Вони починають активно розмножуватися і сміливо рухатися по статевих шляхах вгору, захоплюючи все нові території. Всім відомо, що гонорея нині непогано лікується і її вже майже ніхто не боїться. Але для початку її потрібно знайти. Основним методом пошуку цієї інфекції вважається бак посів, культивація, ідентифікація з допомогою фарбування за Грамом, мікроскопія.

Знайдені у мазку, взятому «на флору» із статевих шляхів, попарно лежать «кавові зерна» (диплококки), не вказують на наявність венеричного захворювання. Така мікрофлора піхви часто з’являється в постменопаузі і ні про що погане не говорить. Відібраний у нестерильних умовах на предметне скло і пофарбований метиленовим синім або за Романовскому (цитологія) мазок, не може диференціювати мікроорганізм. Він може тільки припустити і направити пацієнтку на додаткове дослідження (отримання ізольованої культури).

Слід зауважити, що, якщо зішкріб зі слизових оболонок сечостатевих шляхів, взятий для посіву на уреаплазму, є не таким вже рідкісним явищем, то посіву сечі самі лікарі часто уникають, оскільки з нею працювати складніше.

Труднощі в діагностиці створює хламідійна інфекція, що приносить велику шкоду не тільки при вагітності. Крім цього, хламідія викликає безліч захворювань, властивих не тільки жінкам, але і чоловічому населенню теж, тому її сіють, культивують, вивчають, визначають чутливість до антибактеріальної терапії і, таким чином, борються з нею.

При вагітності взагалі без бактеріологічного посіву важко обійтися, оскільки багато мікроорганізми, маскуючись в цитологічному мазку, можуть бути пропущені. Між тим, вплив деяких збудників ЗПСШ на плід буває згубним. До того ж лікувати вагітну жінку значно складніше, а призначати антибіотики «на око» просто неприпустимо.

Методи посіву

Для виділення чистих культур збудників на першому етапі вдаються до їх посіву на відповідні середовища, який проводиться в спеціальних (стерильних!) умовах. В основному, перенесення матеріалу на середовище здійснюється з допомогою пристосувань, застосовуваних ще в 19 повіки великим Луї Пастером:

Звичайно, багато інструменти за 2 повіки перетерпіли зміни, на зміну прийшли пластикові стерильні одноразові, однак і старі не залишилися в минулому, продовжуючи і понині служити мікробіологічної науки.

Перший етап отримання колоній вимагає дотримання певних правил:

1. Посів здійснюється над спиртовкою в боксі, попередньо обробленому дезінфектантами та кварцуванням, або в ламінарному шафі, що забезпечує стерильність в робочій зоні;
2. Одяг медпрацівника, рукавички і середовище також повинні бути стерильними, оскільки зворотне заважає виділенню ізольованих штамів;
3. Працювати в боксі потрібно швидко, але акуратно, не можна розмовляти і відволікатися при цьому необхідно пам’ятати про особисту безпеку, адже матеріал може бути заразним.

Виділення штамів і вивчення чистих культур

Виділення штамів не завжди однаково, оскільки деякі біологічні середовища, що знаходяться в людському організмі вимагають індивідуального підходу, наприклад, гемокультуру (кров) спочатку в рідкому середовищі (співвідношення 1 : 10) трохи «підрощувати», оскільки кров (нерозведена) може вбити мікроорганізми, а потім, через добу або більше, пересівають на чашки Петрі.

Посів сечі, промивних шлункових вод та інших рідких матеріалів теж має свої особливості, де для отримання чистої культури, рідина спочатку слід центрифугувати (умови – асептичні!), а вже потім сіяти, причому не саму воду, а її осад.

Культивування та вирощування колоній здійснюють на чашках Петрі або поміщають спочатку в рідку середу, розлиту в стерильні пляшечки, а потім ізольовані колонії ще раз висівають, але вже на скошений агар і матеріал поміщають на добу в термостат. Переконавшись у чистоті отриманої культури, штами переносять на предметне скло, роблять мазок і забарвлюють за Грамом (найчастіше), Цилю-Нільсену і ін. і для диференціювання вивчають морфологію мікроба під мікроскопом:

*Читач, певно, чув про таке збудника, як бліда трепонема? Це – збудник сифілісу, а її назва (бліда) тому і з’явилося, що вона погано сприймає фарби і залишається злегка рожевою при фарбуванні по Романовському. Мікроорганізми, невоспринимающие анілінові барвники називаються грамнегативними, а сприймають – грампозитивні. Грамнегативних бактерій надають рожевий або червоний колір при фарбуванні за Грамом додаткові барвники (фуксин, сафранін).

Бак посів можна назвати древнім аналізом, однак його популярність від цього аж ніяк не падає, хоча сучасна бактеріологія має можливості виділення не тільки штамів, але і окремої клітини з нього, яка називається клоном. Однак для отримання клону необхідний спеціальний прилад – микроманипулятор, який в звичайних лабораторіях відсутня, оскільки застосовується, в основному, в науково-дослідних цілях (генетичні дослідження).