ІФА-аналіз крові: метод, діагностика на ВІЛ, сифіліс

ІФА-діагностика: у чому суть, визначення антитіл, як проводять і при яких хворобах ефективна?

ІФА (імуноферментний аналіз, ELISA – англ.) увійшов у життя практичної медицини ще десь у 60-х минулого повіки. Первісної його завданням були гістологічні дослідження в наукових цілях, які зводилися до пошуку та ідентифікації антигенної структури клітин живого організму.

В основі методу ІФА лежить взаємодія специфічних антитіл (АТ) і споріднених антигенів (АГ) з утворенням комплексу «антиген – антитіло», який виявляють за допомогою ферменту. Цей факт наштовхнув учених на думку, що метод може бути використаний в діагностичних цілях для виявлення специфічних імуноглобулінів різних класів, що беруть участь в імунній відповіді на ту чи іншу інфекцію. І це був прорив у клінічній лабораторній діагностиці!

Активно використовуватися метод почав лише на початку 80-х і то, в основному, в спеціалізованих установах. Першими імуноферментними аналізаторами були забезпечені центри та станції переливання крові, інфекційні та венерологічні стаціонари, оскільки народжений на африканському континенті, що з’явився на горизонті у нас і тут же примкнув до «старих» інфекцій грозний СНІД, вимагав негайних заходів діагностики та пошуку медичних препаратів, що впливають на нього.

Область застосування методу ІФА

Можливості імуноферментного аналізу воістину великі. Тепер і уявити собі важко, як можна обійтися без подібних досліджень, застосовуваних буквально у всіх галузях медицини. Здається, що може зробити ІФА в онкології? Виявляється, може. І багато. Здатність аналізу знаходити маркери, властиві деяким видам злоякісних новоутворень, лежить в основі раннього виявлення пухлини, коли іншим способом вона ще не визначається із-за своїх невеликих розмірів.

ИФА-анализ крови: метод, диагностика на ВИЧ, сифилисСучасна клінічна лабораторна діагностика (закладу кдл), крім онкомаркерів, володіє значним арсеналом панелей для ІФА і використовує їх для діагностики різних патологічних станів (інфекційних процесів, гормональних порушень) і моніторингу фармацевтичних лікувальних препаратів з метою виявлення їх впливу на організм хворого і, до речі, не тільки людини. В даний час імуноферментний аналіз широко використовується і у ветеринарній службі, адже «брати наші менші» теж схильні до багатьох захворювань, від яких часом дуже сильно страждають.

Таким чином, ІФА, завдяки своїй чутливості та специфічності, за зразком крові, взятої з вени, може визначити:

  • Гормональний статус (гормони щитовидної залози і надниркових залоз, статеві гормони);
  • Присутність вірусної і бактеріальної інфекції (ВІЛ, гепатити В і С, хламідіоз, сифіліс, уреа — та мікоплазмоз, герпетична та TORCH-інфекції, а також інші хвороби, викликані патогенними мікроорганізмами);
  • Сліди життєдіяльності мікроорганізмів, возбудивших інфекційний процес, який благополучно закінчився і перейшов в стадію формування імунної відповіді на цей збудник. Такі сліди, тобто, антитіла, у багатьох випадках залишаються циркулювати в крові довічно, чим захищають людину від повторного зараження.
  • В чому суть ІФА?

    Імуноферментний метод, дозволяє визначити не тільки присутність самого збудника (якісний аналіз), але і його кількісний вміст у сироватці крові хворого.

    Вирусовая або бактеріальна доза істотно впливає на перебіг інфекційного процесу і його результат, тому кількісному аналізу відведена не остання роль в діагностиці і лікуванні захворювань у різних формах та стадіях.

    Однак знаючи імуноферментні дослідження, як метод ІФА, ми навіть не замислюємося, як же йому вдається охопити такий широкий круг мікроорганізмів, що населяють нашу планету, багато з яких несуть пряму загрозу здоров’ю і життю людини та тварин. А справа в тому, що ІФА має багато варіантів (неконкурентний і конкурентний – прямий і непрямий), кожен з яких вирішує свою задачу і, таким чином, дозволяє проводити цілеспрямований пошук.

    Для виявлення імуноглобулінів того чи іншого класу використовується традиційна 96-лункова полістирол панель (планшет), у комірках якої в твердій фазі зосереджені сорбованих рекомбінантні білки. Потрапили в лунку з сироваткою крові антитіла або антигени, знаходять «знайомий» об’єкт і утворюють з ним комплекс АГ – АТ), який, закріпившись ферментним кон’югатом, при зчитуванні результатів проявиться зміною забарвлення лунки.

    ИФА-анализ крови: метод, диагностика на ВИЧ, сифилис

    Імуноферментний аналіз проводиться на тест-системах певної специфічності, виготовлених у спеціальних лабораторіях і укомплектовані всіма необхідними реагують компонентами. Дослідження можна проводити з допомогою промивних апаратів («вошеров») і зчитувальних спектрофотометрів, де здебільшого задіяний ручна праця. На повних автоматах, звільняють лаборанта від монотонного закапування, промивання і інших рутинних справ, звичайно, працювати швидше і зручніше, але не всі лабораторії можуть дозволити собі таку розкіш і продовжують працювати по-старому – на напівавтоматах.

    Інтерпретація результатів ІФА знаходиться в компетенції лікаря лабораторної діагностики, при цьому обов’язково береться до уваги й притаманне практично всім иммунохимическим реакцій властивість давати псевдопозитивні або помилково негативні відповіді.

    Відео: сучасне проведення імуноферментного аналізу

    Результати ІФА на прикладі сифілісу

    Імуноферментний аналіз підходить для виявлення всіх форм сифілісу, а, крім цього, застосовується у проведенні скринінгових досліджень. Для проведення аналізу використовують венозну кров пацієнта, взяту натщесерце. В роботі використовуються планшети з певною специфічністю (АТ класів А, М, G) або сумарні антитіла.

    ИФА-анализ крови: метод, диагностика на ВИЧ, сифилис

    Враховуючи те, що АТ при сифілісі продукуються в конкретній послідовності, ІФА може легко відповісти на питання, коли відбулося зараження і в якій стадії знаходиться процес, а розшифровка отриманих результатів може бути представлена в наступному вигляді:

  • IgM вказують на тривалість інфекційного процесу (можуть з’являтися при загостренні хронічних запальних захворювань);
  • IgA констатують, що зараження сталося понад місяць тому;
  • IgG свідчать про те, що інфекція знаходиться в самому розпалі або про проведеному нещодавно лікуванні, що легко з’ясовується при зборі анамнезу.
  • При проведенні аналізу на сифіліс, лунки з негативною відповіддю (і негативний контроль) залишаться безбарвними, в той час як позитивний результат (як позитивний контроль) дасть яскраво-жовте забарвлення за рахунок зміни кольору хромогена, доданого в ході дослідження. Однак інтенсивність забарвлення не завжди збігається з контролем, тобто, вона може бути трохи блідіше або злегка жовтуватим. Це сумнівні результати, які, як правило, підлягають повторному дослідженню з обов’язковим урахуванням кількісних показників, отриманих на спектрофотометрі, але в цілому, забарвлення знаходиться в прямо пропорційній залежності від кількості імунних комплексів (пов’язані між собою АГ і АТ).

    Самий хвилюючий з імуноферментних аналізів — ІФА на ВІЛ

    Аналіз на ВІЛ, мабуть, більше інших цікавий широкому колу населення, адже поки не можна з упевненістю стверджувати, що зникли багато соціальні проблеми (проституція, наркоманія та ін). На жаль, ВІЛ зачіпає не тільки ці шари людського суспільства, заразитися можна при різних обставин, не пов’язаних із статевою розбещеністю або прийомом наркотиків. Але коли виникла необхідність обстеження на ВІЛ, то боятися не варто, що все навколо дізнаються про відвідини такої лабораторії. Зараз ВІЛ-інфіковані люди захищені законом, а сумніваються можуть звернутися до анонімні кабінети, де можна вирішити проблему, не боячись розголосу і засудження.

    Імуноферментний метод, застосовуваний для діагностики ВІЛ інфекції, відноситься до першорядним стандартним дослідженням, які, проте, вимагають особливих умов, оскільки тема дуже делікатна.

    ІФА на ВІЛ має сенс проводити після статевого контакту, переливання крові, інших медичних маніпуляцій, що передбачають зараження, і по закінченню інкубаційного періоду («серонегативное вікно»), але слід враховувати, що цей проміжок часу не є постійним. Він може закінчитися через 14-30 днів, а може тривати до півроку, тому середнім значенням прийнято вважати інтервал від 45 до 90 днів. На ВІЛ кров здають так само, як і на інші інфекції – з вени на голодний шлунок. Результати будуть готові в залежності від накопичення матеріалу в лабораторії та її завантаженості (від 2 до 10 днів), хоча найчастіше лабораторії забезпечують отримання відповіді в той же день або на наступний.

    Що можна чекати від результатів на ВІЛ?

    ИФА-анализ крови: метод, диагностика на ВИЧ, сифилисІФА на ВІЛ-інфекцію визначає антитіла до двох різновидів вірусу: ВІЛ-1 (більш поширений в Росії та інших країнах Європи і Азії) і ВІЛ-2 (зустрічається частіше на території Західної Африки).

    Завданням ІФА ВІЛ є пошук АТ класу G, які виявляються на всіх тест-системах, але в більш пізньому періоді, та АТ класів А і М, що виявляються на рекомбінантних тест-набори нового покоління, що дозволяють знайти антитіла на самих ранніх стадіях (інкубаційний період – «серонегативное вікно»). Від ІФА можна очікувати наступні варіанти відповідей:

    1. Первинний позитивний результат: кров підлягає повторній перевірці на тест-системі такого ж типу, але по можливості іншої серії та іншою людиною (лаборантом);
    2. Повторний (+) передбачає новий забір крові у пацієнта з дослідженням її подібно первинного аналізу;
    3. Черговий позитивний результат підлягає референтного аналізу, при якому використовуються високоспецифічні тест-набори (2-3 шт.);
    4. Позитивний результат в обох (або трьох) системах спрямовується на імуноблотінг (той же ІФА, але виконаний в індивідуальному порядку на тест наборах особливо високої специфічності).

    Висновок про ВІЛ інфікування виноситься тільки на підставі імуноблотингу. Проводиться бесіда з інфікованим в умовах повної конфіденційності. Розголошення медичної таємниці в Росії, як, втім, і в інших країнах, підлягає кримінальному покаранню.

    ІФА знаходить хламідію, цитомегаловірус і навіть паразитів

    Аналізи на хламідії і цитомегаловірус імуноферментним методом також здобули особливу популярність, зважаючи на те, що дозволяють визначити час зараження, стадію захворювання та ефективність лікувальних заходів.

    ИФА-анализ крови: метод, диагностика на ВИЧ, сифилис

    При впровадженні хламідії теж можна спостерігати появу антитіл різних класів у різних фазах патологічного стану, викликаного інфекційним агентом:

  • IgM можуть виявитися вже днів через сім після зараження;
  • IgA говорять про те, що інфекція в організмі живе вже більше місяця;
  • IgG підтверджують діагноз хламідіозу, допомагає стежити за лікуванням і визначити його дієвість. Слід зауважити, що антитіла класу G залишаються і циркулюють в організмі незалежно від давності хвороби, тому для правильної розшифровки аналізу потрібно брати до уваги референтні значення (норми), які, до речі, для кожної закладу кдл свої: з урахуванням марки тест-системи та специфічності реагентів, що входять в набір. Значення норми вписуються в бланк поруч з результатом ІФА.
  • Що стосується цитомегаловірусу (ЦМВ), то тут дещо інакше: антитіла класу М з’являються приблизно через місяць-півтора, тобто, позитивним результат (IgM+) стає у фазі первинного інфікування або при реактивації прихованої інфекції і залишається таким від 4 місяців до півроку.

    Наявність АТ класу G характерно для початку первинної гострої інфекції або реінфекції. Аналіз констатує, що вірус має місце, проте інформації, в якій стадії знаходиться інфекційний процес — не дає. Між тим, визначення норми титру IgG теж викликає труднощі, оскільки вона цілком залежить від імунного статусу конкретної людини, який, втім, встановлюється виявленням імуноглобулінів класу G. Враховуючи таку поведінку антитіл, при діагностиці ЦМВІ виникає необхідність в оцінці здібностей антитіл класу G взаємодіяти з ЦМВ, щоб потім «знешкодити» його (авідність АТ). На початковому етапі хвороби IgG дуже погано зв’язуються з антигенами вірусу (низька авідність) і лише потім починають проявляти активність, стало бути, можна говорити про підвищення авідності антитіл.

    ИФА-анализ крови: метод, диагностика на ВИЧ, сифилис

    Алгоритм ІФА-досліджень при підозрі на ЦМВ

    Що таке паразити – навряд чи варто розповідати, адже вони переслідують людини, починаючи з дитячого віку і, в повному розумінні слова, отруюють йому життя (продукти життєдіяльності паразитів дуже отруйні). Вони бувають значних розмірів (гельмінти, а по-простому – глисти) або маленькі (амеби, трихомонади, лямблії).

    До появи клінічної лабораторної діагностики імуноферментного методу знайти паразитів було вельми складно, а тепер, як кажуть: «Немає проблем!». А все тому, що є ІФА, який відшукає паразита, в якій би формі той не перебував (цисти, личинки, яйця або доросла особина) і в якій частині людського тіла не перебував. Для цього потрібно лише взяти кров з вени і знайти антитіла, якими організм вже відповів на чужорідні антигени.

    Про достоїнства імуноферментного аналізу можна говорити довго й багато, адже цей метод зумів вирішити багато діагностичні завдання, використовуючи лише венозну кров. Не потрібно довгих очікувань, хвилювань і проблем з забором матеріалу для дослідження. До того ж тест-системи для ІФА продовжують удосконалюватися і не за горами той день, коли тест видасть 100% достовірність результату.

    Відео: навчальний фільм МГМУ ім. Сеченова про засади ІФА

    За темою:  Лобкові воші (педикульоз, фтириаз): симптоми, лікування

    MAXCACHE: 0.39MB/0.00757 sec