Що це таке ПЛР, опис методу діагностики, розшифровка аналізу

ПЛР — метод діагностики, що дозволяє точно визначити присутність збудника в людському організмі. Володіє високою специфічністю, зручністю і простотою у виконанні. Використовується для визначення деяких видів бактерій і вірусів в біологічних рідинах людини. Найбільш проста реакція здатна встановити лише наявність мікроорганізму, тому не підходить для виявлення збудників, які є частиною мікрофлори. Основний плюс методу в тому, що для проведення аналізу не потрібно великої кількості біологічного матеріалу і особливої підготовки.

1 Що таке ПЛР

ПЛР (полімеразна ланцюгова реакція) — достовірний експериментальний і надчутливий метод діагностики зараження організму хвороботворними мікробами в гострій, хронічній або латентній формі. Спосіб розроблений американським вченим Кері Мюллисом в 1983 році.

Відомі традиційні методи діагностики надають посередні дані про наявність інфекції в організмі, а ПЛР дає пряму вказівку на присутність збудника в крові за фрагментом ДНК.

Що таке Пайпель-біопсія ендометрію і яка техніка проведення діагностики?

Методи діагностики ВІЛ за аналізом крові

Ацетон в сечі: причини явища та методи діагностики

1.1 Принцип роботи

ДНК (дезоксирибонуклеїнова кислота) відповідає за всю генетичну інформацію в будь-якому живому організмі. Вона складається з послідовності 4 нуклеотидів: Г (гуанін), А (аденін), Ц (цитозин) і Т (тимін). Біологічна макромолекула має форму подвійної спіралі і побудована за принципом комплементарної пари: А з’єднується з Т а Р з Ц.

У кожного живого організму є своя ДНК, причому для визначення приналежності макромолекули досить невеликого її відрізка. Деякі найпростіші мікроби зберігають свою генетичну інформацію в РНК, але і вони підлягають дослідженню за допомогою полімеразної ланцюгової реакції.

Саме на виявленні відрізка (який ідентифікує мікроорганізм) і побудована методика молекулярної діагностики. Один цикл триває близько 3 хвилин і полягає у створенні безлічі копій досліджуваного матеріалу. Зразок з’єднується з праймерами – специфічними ділянками ДНК. На останньому етапі оцінюється кількість сполук з молекулами, схожими з вірусом, за допомогою різних фізико-хімічних методів.

2 Правила здачі аналізу

Для успішного проведення аналізу необхідно дотримуватися загальних рекомендацій:

  • дотримуватися стерильність;
  • виключити фізичні і психологічні навантаження перед проведенням аналізу;
  • напередодні дослідження відмовитися від прийому спиртних напоїв;
  • не палити хоча б 60 хвилин до здачі крові;
  • якщо є необхідність здати мазок, то варто провести гігієну статевих органів і виключити сексуальні контакти за 2 доби до дослідження; кращий час проведення аналізу для жінок — це пара днів до або після місячних;
  • постаратися не вживати їжу і не пити рідину перед здачею крові.
За темою:  Лапароскопія при ендометріозі матки, яєчників: як проходить, що після

При дослідженні методом ПЛР необов’язково суворо дотримуватися ці вказівки, так як його коректність і достовірність не обумовлені цими факторами.

3 Захворювання, обумовлені методом ПЛР

За допомогою ПЛР можна визначити практично будь-яку, навіть приховану вірусну і бактеріальну інфекцію. Для аналізу береться не тільки кров, а й інші клінічні матеріали пацієнта: насіннєва рідина у чоловіків, слина, сеча, мазки з сечовипускального каналу і з нижнього сегменту матки. Результат буде містити більше інформації в тому випадку, якщо джерело хвороби вже проник в кров.

У зв’язку з цим обставиною ПЛР крові призначають при таких патологіях:

  • запалення тканин печінки форм А, В, С, D і TT, гепатити З, В;
  • цитомегаловірусна інфекція;
  • захворювання, викликані вірусами групи герпесу різних типів та вірусом імунодефіциту людини (ВІЛ);
  • патології, що вражають дітей та дорослих при зараженні вірусами роду ентеровірус (enterovirus);
  • оперізувальний герпес (herpes zoster) — одностороннє герпетиформное висипання на шкірі з сильним больовим синдромом;
  • розеола (rubiolla) — заразна дитяча хвороба, що супроводжується плямистою висипкою;
  • поширене захворювання паразитарного характеру, що викликається протистом токсоплазма (toxoplasma gondii), — токсоплазмоз, зустрічається як у людини, так і у тварин;
  • інфекційний мононуклеоз (mononucleosis infectiosa) — гостра вірусна патологія, яка супроводжується нападами лихоманки, ураженням зіву, печінки, селезінки і специфічним зміною складу крові;
  • бактеріальна інфекція, що викликається бактерією лістерія (listeria monocytogenes), яка потрапляє в організм з їжею.

Враховуючи, що аналіз ПЛР проводиться і з інших матеріалів пацієнтів, то до патологій, які можна виявити за допомогою цього методу, додаються:

  • бактеріальний вагіноз (gardnerella vaginalis) — поширене гінекологічне захворювання, яке розвивається через підвищення рівня бактерій;
  • мікоплазмоз – збудником цієї хвороби є організми мікоплазми, інфекція передається статевим, внутрішньоутробним і натальними шляхами;
  • гостра кишкова інфекція, що викликається сальмонелами, вражає органи шлунково-кишкового тракту;
  • дифтерит – заразна хвороба, переважно дитячий, провокує коринебактерией (corynebacterium diphtheria);
  • туберкульоз — патологія, яка провокується різними видами мікробактерій (в основному паличкою Коха), атакує легені, кістки, суглоби і кишечник;
  • ВПЛ – інфекція, що відноситься до ІПСШ (інфекцій, що передаються статевим шляхом), збудник – вірус папіломи людини (існує приблизно сто типів цього вірусу, деякі викликають ураження урогенітального тракту, інші впливають на шкіру);
  • трихомоніаз – захворювання, яке провокує запалення органів сечостатевої системи, проявляється ознаками кольпіту, уретриту, циститу, проктиту, при відсутності лікування може перейти в хронічну форму.
За темою:  Свербіж при клімаксі, печіння в інтимній зоні: причини, лікування

Зараз набирає популярність ПЛР аналізу крові у вагітних жінок на токсоплазменные-інфекції (T. o. R. C. H.): цитомегаловірус, токсоплазмоз, розеола, оперізуючий герпес. Саме перераховані віруси здатні викликати неправильне розвиток плоду, можуть впливати на його зростання і провокувати патологію.

4 Переваги і недоліки аналізу

Аналіз дає результат з імовірністю 100%, якщо в крові пацієнта є хоча б 2 елементи ДНК джерела зараження.

Це є головною відмінністю методу від інших способів медичної діагностики – імуноферментного аналізу, ОАК і інших.

4.1 Оригінальність, універсальність

Вона обумовлена тим, що в досліджуваному зразку виявляється унікальний, характерний тільки для конкретного збудника фрагмент ДНК. Іншими методами дослідження одержати ці дані неможливо.

Універсальність аналізу робить цей спосіб зручним для хворого – позбавляє пацієнта від процедури здачі крові кілька разів. Може досліджуватися не тільки кров, але й інші матеріали, які містяться в тканинах і виділеннях.

4.2 Швидкість

Не менш важливою особливістю методу є швидкість отримання підсумкових даних. При проведенні дослідження не потрібно виділяти і вирощувати культуру збудника, що забирає велику кількість часу. Збільшує швидкість аналізу і той факт, що метод ПЛР повністю автоматизований.

Спосіб є чутливим, особливо при визначенні інфекцій, які передаються статевим шляхом.

4.3 Недоліки

У цього методу дослідження існує ряд недоліків:

  • Він пред’являє високі вимоги до оснащення біолабораторій. Якщо умови не дотримані, результати можуть показувати неправдиві дані.
  • Не рекомендується застосовувати цей метод при діагностиці гарднереллеза. Це пов’язано з тим, що бактерія знаходиться в нормальній мікрофлорі піхви і буде присутня в аналізі однозначно.
  • Метод нездатний відрізнити мертву і живу клітину збудника.
  • Через мінливості ДНК вірусів для тест-системи ПЛР агент стає невидимим (наприклад, при захворюванні на грип).
За темою:  Мазь від маститу у жінок: як застосовувати, які бувають

5 Результат

Після проведення дослідження пацієнт отримує розшифровку, яка містить 2 варіанти відповіді: позитивний або негативний. Перший вказує на наявність збудника в організмі, а другий — на його відсутність.

З будь-якими отриманими даними повинен ознайомитись лікар. Не можна займатися самолікуванням і відкладати звернення до лікаря.

6 Показання для проведення

Пройти дослідження може кожна людина. Головним показанням для аналізу є підозра на інфекції, які передаються при статевому контакті. Обов’язково здавати кров на токсоплазменные інфекції жінкам, виношує дитину, або при плануванні вагітності.

Призначення на аналіз ПЛР повинен давати кваліфікований лікар. Лікування та діагностика, необхідно проводити в комплексі, для цього можуть знадобитися і інші методики обстеження.

MAXCACHE: 0.41MB/0.04595 sec